实(Shi)验(Yan)材(Cai)料(Liao)与(Yu)试(Shi)剂(Ji)配(Pei)制(Zhi)：(?)
1. 仪(Yi)器(Qi)与(Yu)材(Cai)料(Liao)：(?)酶(Mei)标(Biao)仪(Yi)（(?)使(Shi)用(Yong)前(Qian)预(Yu)热(Re)30分(Fen)钟(Zhong)）(?)，(?)微(Wei)量(Liang)加(Jia)液(Ye)器(Qi)、(?)吸(Xi)头(Tou)、(?)蒸(Zheng)馏(Liu)水(Shui)或(Huo)去(Qu)离(Li)子(Zi)水(Shui)，(?)滤(Lu)纸(Zhi)。(?)
2. 缓(Huan)冲(Chong)液(Ye)使(Shi)用(Yong)：(?)加(Jia)5ul 的(De)缓(Huan)冲(Chong)液(Ye)于(Yu)50ul 的(De)样(Yang)品(Pin)中(Zhong)，(?)如(Ru)果(Guo)样(Yang)品(Pin)量(Liang)不(Bu)够(Gou)或(Huo)者(Zhe)不(Bu)确(Que)定(Ding)，(?)缓(Huan)冲(Chong)液(Ye)和(He)样(Yang)品(Pin)的(De)混(Hun)合(He)比(Bi)例(Li)不(Bu)要(Yao)小(Xiao)于(Yu)1:10即(Ji)可(Ke)。(?)
混(Hun)匀(Yun)，(?)静(Jing)置(Zhi)1小(Xiao)时(Shi)备(Bei)用(Yong)（(?)如(Ru)果(Guo)标(Biao)本(Ben)是(Shi)血(Xue)清(Qing)或(Huo)者(Zhe)血(Xue)浆(Jiang)，(?)此(Ci)步(Bu)骤(Zhou)忽(Hu)略(Lue)）(?)。(?)
3. 洗(Xi)液(Ye)的(De)配(Pei)制(Zhi)：(?)按(An)1:100的(De)比(Bi)例(Li)配(Pei)制(Zhi)洗(Xi)液(Ye)备(Bei)用(Yong)。(?)
样(Yang)品(Pin)收(Shou)集(Ji)、(?)处(Chu)理(Li)及(Ji)保(Bao)存(Cun)
1. 细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)上(Shang)清(Qing)：(?)适(Shi)用(Yong)于(Yu)检(Jian)测(Ce)体(Ti)外(Wai)培(Pei)养(Yang)的(De)细(Xi)胞(Bao)分(Fen)泌(Mi)性(Xing)成(Cheng)份(Fen)。(?)用(Yong)无(Wu)菌(Jun)管(Guan)收(Shou)集(Ji)细(Xi)胞(Bao)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)以(Yi)1000×g离(Li)心(Xin)15分(Fen)钟(Zhong)，(?)收(Shou)集(Ji)上(Shang)清(Qing)。(?)
2. 细(Xi)胞(Bao)：(?)用(Yong)PBS反(Fan)复(Fu)洗(Xi)涤(Di)细(Xi)胞(Bao)3次(Ci)，(?)调(Diao)整(Zheng)细(Xi)胞(Bao)浓(Nong)度(Du)达(Da)到(Dao)104-106/ml 左(Zuo)右(You)，(?)通(Tong)过(Guo)反(Fan)复(Fu)冻(Dong)融(Rong)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)破(Po)坏(Huai)并(Bing)放(Fang)出(Chu)细(Xi)胞(Bao)内(Nei)成(Cheng)份(Fen)，(?)或(Huo)
者(Zhe)细(Xi)胞(Bao)超(Chao)声(Sheng)粉(Fen)碎(Sui)，(?)离(Li)心(Xin)取(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)检(Jian)测(Ce)。(?)
3. 血(Xue)清(Qing)：(?)在(Zai)室(Shi)温(Wen)下(Xia)，(?)血(Xue)液(Ye)自(Zi)然(Ran)凝(Ning)固(Gu)，(?)以(Yi)1000×g离(Li)心(Xin)15分(Fen)钟(Zhong)，(?)取(Qu)上(Shang)清(Qing)待(Dai)测(Ce)。(?)
4. 血(Xue)浆(Jiang)：(?)应(Ying)根(Gen)据(Ju)标(Biao)本(Ben)的(De)要(Yao)求(Qiu)选(Xuan)择(Ze)EDTA 或(Huo)柠(Ning)檬(Meng)酸(Suan)钠(Na)作(Zuo)为(Wei)抗(Kang)凝(Ning)剂(Ji)，(?)混(Hun)合(He)后(Hou)静(Jing)置(Zhi)10-20 分(Fen)钟(Zhong)后(Hou)，(?)以(Yi)1000×g离(Li)心(Xin)15分(Fen)钟(Zhong)，(?)收(Shou)集(Ji)上(Shang)
清(Qing)。(?)
5. 体(Ti)液(Ye)：(?)包(Bao)括(Kuo)胸(Xiong)腹(Fu)水(Shui)、(?)脑(Nao)脊(Ji)液(Ye)，(?)分(Fen)泌(Mi)物(Wu)等(Deng)。(?)使(Shi)用(Yong)不(Bu)含(Han)热(Re)原(Yuan)和(He)内(Nei)毒(Du)素(Su)的(De)离(Li)心(Xin)管(Guan)收(Shou)集(Ji)，(?)以(Yi)1000×g离(Li)心(Xin)15分(Fen)钟(Zhong)，(?)收(Shou)集(Ji)上(Shang)清(Qing)。(?)
6. 组(Zu)织(Zhi)标(Biao)本(Ben)：(?)切(Qie)取(Qu)组(Zu)织(Zhi)标(Biao)本(Ben)，(?)称(Cheng)取(Qu)重(Zhong)量(Liang)0.5mg，(?)加(Jia)入(Ru)500ul 的(De)PBS，(?)用(Yong)手(Shou)工(Gong)或(Huo)匀(Yun)浆(Jiang)器(Qi)，(?)或(Huo)超(Chao)声(Sheng)破(Po)碎(Sui)仪(Yi)将(Jiang)标(Biao)本(Ben)匀(Yun)浆(Jiang)，(?)以(Yi)2000-3000
rmp离(Li)心(Xin)20 分(Fen)钟(Zhong)，(?)收(Shou)集(Ji)上(Shang)清(Qing)进(Jin)行(Xing)检(Jian)测(Ce)。(?)
7. 样(Yang)品(Pin)中(Zhong)不(Bu)能(Neng)含(Han)有(You)NaN3，(?)因(Yin)NaN3 抑(Yi)制(Zhi)辣(La)根(Gen)过(Guo)氧(Yang)化(Hua)物(Wu)酶(Mei)的(De)（(?)HRP）(?)活(Huo)性(Xing)。(?)
8. 保(Bao)存(Cun)：(?)如(Ru)果(Guo)样(Yang)品(Pin)不(Bu)能(Neng)立(Li)即(Ji)检(Jian)测(Ce)，(?)应(Ying)将(Jiang)其(Qi)分(Fen)装(Zhuang)，(?)-70 ℃(?)保(Bao)存(Cun)，(?)避(Bi)免(Mian)反(Fan)复(Fu)冷(Leng)冻(Dong)。(?)保(Bao)存(Cun)过(Guo)程(Cheng)中(Zhong)如(Ru)出(Chu)现(Xian)沉(Chen)淀(Dian)，(?)应(Ying)再(Zai)次(Ci)离(Li)心(Xin)。(?)血(Xue)液(Ye)标(Biao)本(Ben)尽(Jin)可(Ke)能(Neng)的(De)不(Bu)要(Yao)使(Shi)用(Yong)溶(Rong)血(Xue)或(Huo)高(Gao)血(Xue)脂(Zhi)血(Xue)。(?)如(Ru)果(Guo)血(Xue)清(Qing)中(Zhong)含(Han)大(Da)量(Liang)颗(Ke)粒(Li)，(?)检(Jian)测(Ce)前(Qian)先(Xian)离(Li)心(Xin)或(Huo)过(Guo)滤(Lu)。(?)不(Bu)要(Yao)在(Zai)37℃(?)或(Huo)更(Geng)高(Gao)的(De)温(Wen)度(Du)加(Jia)热(Re)解(Jie)冻(Dong)。(?)应(Ying)在(Zai)室(Shi)温(Wen)下(Xia)解(Jie)冻(Dong)并(Bing)确(Que)保(Bao)样(Yang)品(Pin)均(Jun)匀(Yun)地(Di)充(Chong)分(Fen)解(Jie)冻(Dong)。(?)

原(Yuan)理(Li):
采(Cai)用(Yong)双(Shuang)抗(Kang)体(Ti)夹(Jia)心(Xin)法(Fa)测(Ce)定(Ding)人(Ren)雄(Xiong)激(Ji)素(Su)结(Jie)合(He)蛋(Dan)白(Bai)（(?)ABP）(?)水(Shui)平(Ping)。(?)用(Yong)纯(Chun)化(Hua)的(De)人(Ren)雄(Xiong)激(Ji)素(Su)结(Jie)合(He)蛋(Dan)白(Bai)（(?)ABP）(?)抗(Kang)体(Ti)包(Bao)被(Bei)微(Wei)孔(Kong)板(Ban)，(?)制(Zhi)成(Cheng)固(Gu)相(Xiang)载(Zai)体(Ti)，(?)实(Shi)验(Yan)时(Shi)依(Yi)次(Ci)在(Zai)微(Wei)孔(Kong)板(Ban)中(Zhong)加(Jia)入(Ru)样(Yang)本(Ben)及(Ji)标(Biao)准(Zhun)品(Pin)，(?)并(Bing)加(Jia)入(Ru) HRP 标(Biao)记(Ji)的(De) ABP 抗(Kang)体(Ti)，(?)形(Xing)成(Cheng)抗(Kang)体(Ti)-抗(Kang)原(Yuan)-酶(Mei)标(Biao)抗(Kang)体(Ti)复(Fu)合(He)物(Wu)，(?)反(Fan)复(Fu)洗(Xi)涤(Di)后(Hou)加(Jia)底(Di)物(Wu) TMB 显(Xian)色(Se)。(?)TMB 在(Zai)过(Guo)氧(Yang)化(Hua)物(Wu)酶(Mei)的(De)催(Cui)化(Hua)下(Xia)转(Zhuan)化(Hua)为(Wei)蓝(Lan)色(Se)，(?)再(Zai)用(Yong)硫(Liu)酸(Suan)终(Zhong)止(Zhi)反(Fan)应(Ying)，(?)转(Zhuan)变(Bian)成(Cheng)黄(Huang)色(Se)。(?)颜(Yan)色(Se)的(De)深(Shen)浅(Qian)和(He)样(Yang)品(Pin)中(Zhong)的(De) ABP含(Han)量(Liang)呈(Cheng)正(Zheng)相(Xiang)关(Guan)。(?)采(Cai)用(Yong)酶(Mei)标(Biao)仪(Yi)在(Zai) 450nm 波(Bo)长(Chang)测(Ce)定(Ding)吸(Xi)光(Guang)度(Du)（(?)OD 值(Zhi)）(?)，(?)根(Gen)据(Ju)标(Biao)准(Zhun)曲(Qu)线(Xian)，(?)计(Ji)算(Suan)测(Ce)试(Shi)样(Yang)品(Pin)中(Zhong) ABP 浓(Nong)度(Du)。(?) 
操(Cao)作(Zuo)步(Bu)骤(Zhou)：(?)
1. 取(Qu)出(Chu)试(Shi)剂(Ji)盒(He)，(?)室(Shi)温(Wen)（(?)20-25℃(?)）(?)放(Fang)置(Zhi) 30 分(Fen)钟(Zhong)。(?)
2. 分(Fen)组(Zu)：(?)取(Qu)出(Chu) 96 孔(Kong)板(Ban)，(?)根(Gen)据(Ju)待(Dai)测(Ce)样(Yang)品(Pin)数(Shu)量(Liang)加(Jia)上(Shang)标(Biao)准(Zhun)品(Pin)的(De)数(Shu)量(Liang)决(Jue)定(Ding)所(Suo)需(Xu)的(De)板(Ban)条(Tiao)数(Shu)，(?)把(Ba)剩(Sheng)余(Yu)的(De)板(Ban)条(Tiao)继(Ji)续(Xu)冷(Leng)藏(Cang)处(Chu)理(Li)。(?)分(Fen)别(Bie)设(She)标(Biao)准(Zhun)
品(Pin)组(Zu)（(?)6 个(Ge)浓(Nong)度(Du)）(?)、(?)空(Kong)白(Bai)孔(Kong)、(?)待(Dai)测(Ce)样(Yang)品(Pin)组(Zu)。(?)
注(Zhu)：(?)为(Wei)减(Jian)少(Shao)实(Shi)验(Yan)误(Wu)差(Cha)，(?)保(Bao)证(Zheng)准(Zhun)确(Que)性(Xing)，(?)建(Jian)议(Yi)设(She)置(Zhi)复(Fu)孔(Kong)。(?)
3. 加(Jia)样(Yang)：(?)依(Yi)照(Zhao)标(Biao)准(Zhun)品(Pin)的(De)顺(Shun)序(Xu)分(Fen)别(Bie)加(Jia)入(Ru) 50ul 的(De)标(Biao)准(Zhun)品(Pin)溶(Rong)液(Ye)于(Yu)空(Kong)白(Bai)微(Wei)孔(Kong)中(Zhong)；(?)空(Kong)白(Bai)对(Dui)照(Zhao)孔(Kong)加(Jia)入(Ru) 50ul 的(De)蒸(Zheng)馏(Liu)水(Shui)；(?)其(Qi)余(Yu)微(Wei)孔(Kong)中(Zhong)加(Jia)入(Ru) 50ul
的(De)待(Dai)测(Ce)样(Yang)本(Ben)。(?)
4. 加(Jia)酶(Mei)标(Biao)溶(Rong)液(Ye)：(?)标(Biao)准(Zhun)品(Pin)组(Zu)、(?)待(Dai)测(Ce)样(Yang)本(Ben)组(Zu)各(Ge)孔(Kong)中(Zhong)加(Jia)入(Ru) 100ul 的(De)酶(Mei)标(Biao)溶(Rong)液(Ye)（(?)空(Kong)白(Bai)对(Dui)照(Zhao)孔(Kong)除(Chu)外(Wai)）(?)。(?)
5. 温(Wen)育(Yu)：(?)酶(Mei)标(Biao)板(Ban)用(Yong)封(Feng)板(Ban)纸(Zhi)密(Mi)封(Feng)后(Hou)，(?)放(Fang)入(Ru)湿(Shi)盒(He)内(Nei)于(Yu) 37℃(?)恒(Heng)温(Wen)孵(Fu)育(Yu) 1 小(Xiao)时(Shi)。(?)
6. 洗(Xi)板(Ban)：(?)用(Yong)稀(Xi)释(Shi)后(Hou)的(De)洗(Xi)涤(Di)液(Ye)注(Zhu)满(Man)每(Mei)孔(Kong)，(?)静(Jing)置(Zhi) 15-30s，(?)充(Chong)分(Fen)清(Qing)洗(Xi)酶(Mei)标(Biao)板(Ban) 5 次(Ci)，(?)用(Yong)吸(Xi)水(Shui)纸(Zhi)*拍(Pai)干(Gan)。(?)
7. 显(Xian)色(Se)：(?)各(Ge)孔(Kong)加(Jia)入(Ru)显(Xian)色(Se)剂(Ji) A 液(Ye) 50ul 后(Hou)，(?)再(Zai)加(Jia)入(Ru)显(Xian)色(Se)剂(Ji) B 液(Ye) 50ul。(?)
8. 终(Zhong)止(Zhi)：(?)25-37℃(?)下(Xia)避(Bi)光(Guang)反(Fan)应(Ying) 10-15 分(Fen)钟(Zhong)，(?)加(Jia)入(Ru) 50ul 终(Zhong)止(Zhi)液(Ye)。(?)
9. 读(Du)板(Ban)：(?)在(Zai) 450nm 波(Bo)长(Chang)读(Du)取(Qu)各(Ge)孔(Kong)的(De) OD 值(Zhi)。(?)
注(Zhu)：(?)读(Du)板(Ban)时(Shi)必(Bi)须(Xu)拭(Shi)干(Gan)板(Ban)底(Di)残(Can)留(Liu)的(De)液(Ye)体(Ti)和(He)手(Shou)指(Zhi)痕(Hen)迹(Ji)，(?)读(Du)板(Ban)时(Shi)间(Jian)控(Kong)制(Zhi)在(Zai)终(Zhong)止(Zhi)反(Fan)应(Ying)后(Hou)的(De) 30 分(Fen)钟(Zhong)内(Nei)，(?)以(Yi)免(Mian)影(Ying)响(Xiang)准(Zhun)确(Que)性(Xing)。(?)
注(Zhu)意(Yi)事(Shi)项(Xiang)：(?)
1. 实(Shi)验(Yan)操(Cao)作(Zuo)中(Zhong)必(Bi)须(Xu)使(Shi)用(Yong)一(Yi)次(Ci)性(Xing)吸(Xi)头(Tou)，(?)避(Bi)免(Mian)交(Jiao)叉(Cha)污(Wu)染(Ran)。(?)
2. 加(Jia)样(Yang)：(?)加(Jia)样(Yang)时(Shi)，(?)要(Yao)控(Kong)制(Zhi)加(Jia)样(Yang)速(Su)度(Du)，(?)避(Bi)免(Mian)*孔(Kong)与(Yu)后(Hou)一(Yi)孔(Kong)间(Jian)的(De)时(Shi)间(Jian)间(Jian)隔(Ge)过(Guo)大(Da)，(?)否(Fou)则(Ze)将(Jiang)会(Hui)导(Dao)致(Zhi)不(Bu)同(Tong)的(De)预(Yu)孵(Fu)育(Yu)时(Shi)间(Jian)，(?)从(Cong)而(?)影(Ying)响(Xiang)实(Shi)验(Yan)的(De)准(Zhun)确(Que)性(Xing)以(Yi)及(Ji)重(Zhong)复(Fu)性(Xing)。(?)
3. 孵(Fu)育(Yu)：(?)严(Yan)格(Ge)按(An)照(Zhao)说(Shuo)明(Ming)书(Shu)上(Shang)规(Gui)定(Ding)的(De)孵(Fu)育(Yu)时(Shi)间(Jian)和(He)温(Wen)度(Du)进(Jin)行(Xing)。(?)
4. 反(Fan)应(Ying)时(Shi)间(Jian)的(De)控(Kong)制(Zhi)：(?)加(Jia)入(Ru)底(Di)物(Wu)后(Hou)请(Qing)定(Ding)时(Shi)观(Guan)察(Cha)反(Fan)应(Ying)孔(Kong)的(De)颜(Yan)色(Se)变(Bian)化(Hua)，(?)如(Ru)果(Guo)颜(Yan)色(Se)较(Jiao)深(Shen)，(?)请(Qing)提(Ti)前(Qian)加(Jia)入(Ru)终(Zhong)止(Zhi)液(Ye)终(Zhong)止(Zhi)反(Fan)应(Ying)。(?)
5. 建(Jian)议(Yi)实(Shi)验(Yan)前(Qian)预(Yu)测(Ce)样(Yang)品(Pin)含(Han)量(Liang)，(?)如(Ru)样(Yang)品(Pin)浓(Nong)度(Du)过(Guo)高(Gao)，(?)应(Ying)对(Dui)样(Yang)品(Pin)进(Jin)行(Xing)稀(Xi)释(Shi)，(?)计(Ji)算(Suan)结(Jie)果(Guo)时(Shi)乘(Cheng)以(Yi)相(Xiang)应(Ying)的(De)稀(Xi)释(Shi)倍(Bei)数(Shu)。(?)
6. 建(Jian)议(Yi)使(Shi)用(Yong)本(Ben)试(Shi)剂(Ji)盒(He)时(Shi)先(Xian)做(Zuo)预(Yu)实(Shi)验(Yan)（(?)即(Ji)先(Xian)做(Zuo)标(Biao)准(Zhun)曲(Qu)线(Xian)，(?)试(Shi)用(Yong)几(Ji)个(Ge)标(Biao)本(Ben)）(?)，(?)如(Ru)果(Guo)对(Dui)本(Ben)试(Shi)剂(Ji)盒(He)有(You)任(Ren)何(He)疑(Yi)问(Wen)，(?)可(Ke)和(He)所(Suo)购(Gou)经(Jing)销(Xiao)商(Shang)沟(Gou)通(Tong)，(?)如(Ru)果(Guo)因(Yin)运(Yun)输(Shu)过(Guo)程(Cheng)导(Dao)致(Zhi)试(Shi)剂(Ji)盒(He)失(Shi)效(Xiao)，(?)可(Ke)要(Yao)求(Qiu)调(Diao)换(Huan)，(?)但(Dan)概(Gai)不(Bu)承(Cheng)担(Dan)产(Chan)品(Pin)本(Ben)身(Shen)以(Yi)外(Wai)的(De)任(Ren)何(He)损(Sun)失(Shi)。(?)
安(An)全(Quan)性(Xing)
1．(?) 避(Bi)免(Mian)人(Ren)体(Ti)直(Zhi)接(Jie)接(Jie)触(Chu)显(Xian)色(Se)剂(Ji)A、(?)B和(He)终(Zhong)止(Zhi)液(Ye)。(?)一(Yi)旦(Dan)接(Jie)触(Chu)到(Dao)这(Zhe)些(Xie)液(Ye)体(Ti)，(?)请(Qing)尽(Jin)快(Kuai)用(Yong)水(Shui)冲(Chong)洗(Xi)。(?)
2．(?) 实(Shi)验(Yan)中(Zhong)不(Bu)要(Yao)进(Jin)食(Shi)、(?)抽(Chou)烟(Yan)或(Huo)使(Shi)用(Yong)化(Hua)妆(Zhuang)品(Pin)。(?)
3．(?) 不(Bu)要(Yao)用(Yong)嘴(Zui)吸(Xi)取(Qu)试(Shi)剂(Ji)盒(He)里(Li)的(De)任(Ren)何(He)成(Cheng)份(Fen)。(?)
保(Bao)存(Cun)条(Tiao)件(Jian)及(Ji)有(You)效(Xiao)期(Qi)：(?)
1.试(Shi)剂(Ji)盒(He)保(Bao)存(Cun)：(?)2-8℃(?)
2.有(You)效(Xiao)期(Qi)：(?)6个(Ge)月(Yue)